Mea e fa'alavelave ai i tali atu i le PCR

I le taimi o le tali atu o le PCR, e masani ona feagai ma nisi mea faʻalavelave.
Ona o le maualuga tele o le maaleale o le PCR, o le pisia ua manatu o se tasi lea o mea sili ona taua e aʻafia ai taunuuga o le PCR ma e mafai ona maua ai ni taunuuga sese ma lelei.
E tutusa lava le tāua o punaoa eseese e mafua ai ni taunuuga sese-leaga. Afai e taofia pe faalavelaveina se tasi pe sili atu vaega taua o le paluga PCR po o le tali atu o le faʻateleina lava ia, e mafai ona faʻalavelaveina le suʻega faʻamaʻi. E mafai ona mafua ai ona faʻaitiitia le lelei ma e oʻo lava i ni taunuuga sese-leaga.
I le fa’aopoopoga i le taofiofia, e ono tupu le leiloa o le tulaga mautu o le nucleic acid ona o tulaga o felauaiga ma/po’o le teuina a’o le’i saunia le fa’ata’ita’iga. Ae maise lava, o le maualuga o le vevela po’o le le lava o le teuina e ono i’u ai i le fa’aleagaina o sela ma nucleic acid. O le fa’amauina o sela ma aano ma le fa’apipi’iina o le paraffin o ni mafua’aga lauiloa o le vaeluaina o le DNA ma o se fa’afitauli tumau (tagai Ata 1 ma le 2). I nei tulaga, e o’o lava i le vavae’eseina ma le fa’amamāina lelei e le fesoasoani.

Ata 1 | A'afiaga o le fa'amautuina i le tulaga mautu o le DNA
O le electrophoresis o le agarose gel na faʻaalia ai le eseesega tele o le lelei o le DNA na vavaeʻese mai vaega paraffin o autopsies. O le DNA o le umi eseese o vaega sa i ai i totonu o mea na maua e faʻatatau i le auala e faʻamau ai. Na faʻasaoina le DNA pe a faʻamau i totonu o faʻataʻitaʻiga faʻaʻaisa masani ma i totonu o le formalin neutral buffered. O le faʻaaogaina o se Bouin fixative malosi acid poʻo le unbuffered, formic acid-containing formalin na mafua ai le leiloa tele o le DNA. O le vaega o totoe e matua vaeluaina lava.
I le agavale, o le umi o vaega o loʻo faʻaalia i kilobase pairs (kbp)

Ata 2 | Leiloa o le tulaga mautu o sini o le nucleic acid
(a) O le va e 3′-5′ i luga o manoa uma e lua o le a iʻu ai i se motusia i le DNA faʻamoemoeina. O le a faia pea le gaosiga o le DNA i luga o le fasi vaega laʻititi. Peitaʻi, afai e leai se nofoaga e faʻamafanafana ai le primer i luga o le fasi vaega o le DNA, e naʻo le faʻateleina laina e tupu. I le tulaga sili ona lelei, e ono toe faʻatumuina e fasi vaega le tasi ma le isi, ae o le a laʻititi le fua ma e maualalo ifo i le tulaga e iloa ai.
(b) O le leiloa o fa'avae, e mafua ona o le depurination ma le fausiaina o le thymidine dimer, e mafua ai le fa'aitiitia o le aofa'i o H-bonds ma le fa'aitiitia o le Tm. I le taimi o le fa'alauteleina o le fa'amafanafanaga, o le a liusuavai ese ai primers mai le matrix DNA ma o le a le fa'amafanafana e tusa lava pe i lalo o tulaga e le faigata tele.
(c) O fa'avae thymine e lata ane e fausia ai se TT dimer.
O le isi faʻafitauli masani e masani ona tulaʻi mai i suʻesuʻega faʻamolekula o le le lava lea o le faʻasaʻolotoina o nucleic acids faʻatatau pe a faʻatusatusa i le phenol-chloroform extraction. I tulaga ogaoga, e mafai ona fesootaʻi lenei mea ma ni faʻamaoniga sese. E mafai ona sefeina le tele o le taimi e ala i le faʻapuna o le lysis poʻo le faʻamalūina o otaota o le sela e ala i le enzyme, ae o lenei metotia e masani ona iʻu ai i le maualalo o le PCR sensitivity ona o le le lava o le faʻasaʻolotoina o nucleic acid.

Taofia o le gaioiga o le polymerase i le taimi o le faʻateleina

I se tulaga lautele, o le taofiofia e faʻaaogaina o se manatu o se koneteina e faʻamatalaina ai mea uma e oʻo atu ai i taunuuga PCR e le lelei. I se uiga faʻapitoa o le biochemical, o le taofiofia e faʻatapulaʻaina i le gaioiga a le enzyme, o lona uiga, e faʻaitiitia pe taofia ai le liua o le substrate-product e ala i le fegalegaleai ma le nofoaga galue o le DNA polymerase poʻo lana cofactor (e pei o le Mg2+ mo le Taq DNA polymerase).
O vaega i totonu o le faʻataʻitaʻiga poʻo ni buffers eseese ma ni mea faʻaola o loʻo i ai ni reagents e mafai ona taofia saʻo le enzyme pe maileia ai ana cofactors (e pei o le EDTA), ma faʻagata ai le polymerase ma iʻu ai ina faʻaitiitia pe sese le lelei o taunuuga PCR.
Peita'i, o le tele o fegalegaleaiga i le va o vaega o le tali atu ma nucleic acid o lo'o i ai i le sini ua fa'ailogaina fo'i o 'PCR inhibitors'. O le taimi lava e fa'alavelaveina ai le tulaga lelei o le sela e ala i le vavae'eseina ma fa'asa'olotoina le nucleic acid, e mafai ona tupu fegalegaleaiga i le va o le fa'ata'ita'iga ma lona vaila'au fa'ata'amilo ma le vaega mautu. Mo se fa'ata'ita'iga, e mafai e 'scavengers' ona fusifusia le DNA e tasi pe lua-stranded e ala i fegalegaleaiga e le o ni covalent ma fa'alavelave i le vavae'eseina ma le fa'amamāina e ala i le fa'aitiitia o le aofa'i o sini e iu lava ina o'o atu i le va'a tali atu o le PCR.
I se tulaga lautele, o lo'o iai vaila'au fa'a'au'au PCR i le tele o vai o le tino ma vaila'au e fa'aaogaina mo su'ega fa'apitoa (urea i le mimi, hemoglobin ma le heparin i le toto), fa'aopoopoga mea'ai (vaega fa'aola, glycogen, ga'o, Ca2+ ions) ma vaega i le siosiomaga (phenols, u'amea mamafa).

E mafai ona maua ni PCR inhibitors e sili atu ona taatele i siama ma sela eukaryotic, DNA e le o fa'atatau i ai, DNA-binding macromolecules o tissue matrices ma meafaigaluega i le fale su'esu'e e pei o totigilima ma palasitika. O le fa'amamāina o nucleic acids i le taimi po'o le mae'a ai ona fa'amamāina o le auala sili lea ona lelei mo le aveeseina o PCR inhibitors.
I aso nei, e mafai e le tele o masini fa'a'ese'ese otometi ona suia le tele o faiga fa'atino lima, ae e le'i ausia lava le 100% toe fa'aleleia ma/po'o le fa'amamāina o sini. Atonu o lo'o iai pea ni mea e taofia ai le siama i totonu o nucleic acid ua fa'amamāina pe atonu fo'i ua uma ona aoga. E iai ni fuafuaga eseese e fa'aitiitia ai le a'afiaga o mea e taofia ai le siama. O le filifilia o le polymerase talafeagai e mafai ona i ai se a'afiaga tele i le gaioiga o mea e taofia ai le siama. O isi metotia ua fa'amaonia e fa'aitiitia ai le taofia o le PCR o le fa'ateleina lea o le maualuga o le polymerase po'o le fa'aaogaina o mea fa'aopoopo e pei o le BSA.
E mafai ona faʻaalia le taofiofia o tali atu o le PCR e ala i le faʻaaogaina o le pulea lelei o le faiga i totonu (IPC).
E tatau ona fa'aeteete i le aveeseina o mea fa'aoga uma ma isi vaila'au o lo'o i totonu o le pusa e aveese ai siama, e pei o le ethanol, EDTA, CETAB, LiCl, GuSCN, SDS, isopropanol ma le phenol, mai le nucleic acid isolate e ala i le fufuluina mae'ae'a. E fuafua i lo latou malosi, e mafai ona latou fa'agaoioia pe taofia ai le PCR.