Fa'alavelave fa'alavelave i tali PCR

I le taimi o le PCR tali, o nisi mea faʻalavelave e masani ona faʻafeiloaʻi.
Ona o le maualuga o le ma'ale'ale o le PCR, o le fa'aleagaina ua manatu o se tasi o mea sili ona taua e a'afia ai i'uga o le PCR ma e mafai ona maua ai ni fa'ai'uga lelei sese.
E tutusa lava le taua o punaoa eseese e tau atu i taunuuga sese-le lelei. Afai o se tasi pe sili atu vaega taua o le paluga PCR poʻo le faʻalauteleina o gaioiga lava ia e faʻalavelave pe faʻalavelave i ai, e mafai ona faʻalavelaveina le suʻega faʻamaonia. O lenei mea e mafai ona taʻitaʻia ai le faʻaitiitia o le lelei ma e oʻo lava i taunuuga le lelei sese.
E le gata i le taofiofia, o le leiloa o le sa'o o le nucleic acid e mafai ona tupu ona o le felauaiga ma/po'o le teuina o tulaga a'o le'i faia sauniuniga faataitai. Aemaise lava, o le maualuga o le vevela poʻo le le lava o le teuina e mafai ona faʻaleagaina ai sela ma nucleic acids. O le fa'apipi'iina o sela ma aano ma le fa'apipi'iina o paraffini o mafua'aga iloga ia o le vaevaega o le DNA ma se fa'afitauli faifaipea (silasila i Ata 1 ma le 2). I nei tulaga, e oʻo lava i le faʻaesea ma le faʻamamaina sili ona lelei o le a le fesoasoani.

Ata 1 | Aafiaga o le le mafai ona gaoioi i le faʻamaoni DNA
Na fa'aalia e Agarose gel electrophoresis e matua'i fesuisuia'i le tulaga lelei o le DNA na tu'uesea mai vaega paraffin o autopsies. O le DNA e eseese le umi o vaega o lo'o i ai i fa'amaumauga e fa'atatau i le auala e fa'amauina ai. E na'o le DNA na fa'asaoina pe a fa'amauina i fa'ata'ita'iga fa'aaisa fa'aonaponei ma i totonu ole formalin fa'apa'u. O le fa'aogaina o le Bouin malosi fa'asa'o fa'asa'o po'o le fa'asalaina, formic acid-containing formalin na mafua ai le leiloa tele o DNA. O le vaega totoe o lo'o matua vaevae.
I le agavale, o le umi o vaevaega o lo'o fa'aalia i kilobase pairs (kbp)

Ata 2 | Leaiina o le fa'amaoni o fa'amoemoega o le nucleic acid
(a) O le va 3'-5' i luga o manoa uma e lua o le a iu ai i le motusia o le DNA taulaʻi. o le a tupu pea le tu'ufa'atasiga o le DNA i luga o le fasi vaega itiiti. Ae peita'i, afai o lo'o misi se nofoaga fa'apipi'i muamua i le vaega o le DNA, na'o le fa'alauteleina o le laina e tupu. I le tulaga sili ona lelei, e mafai e fasi vaega ona toe faʻaleleia le tasi ma le isi, ae o fua o le a laʻititi ma lalo ifo o le maualuga o le iloa.
(b) Le leiloa o fa'avae, e mafua ona o le fa'amamāina ma le fa'atupuina o le thymidine dimer, e mafua ai le fa'aitiitia o le aofa'i o fusi-H ma fa'aitiitia ai le Tm. I le taimi o le fa'a'umi'umi fa'amafanafana, o le a liusuavai mea muamua mai le matrix DNA ma o le a le fa'afefeteina e tusa lava pe i lalo o tulaga fa'aletonu.
(i) O fa'avae thymine lata ane e fai ai se TT dimer.
O le isi fa'afitauli masani e masani ona tupu i su'esu'ega mole mole o le fa'aitiitiga o le fa'asa'olotoina o su'esu'ega nucleic fa'atatau ile phenol-chloroform extraction. I tulaga ogaoga, e mafai ona fesoʻotaʻi ma mea sese sese. E mafai ona fa'asaoina le tele o le taimi e ala i le fa'apunaina o le lysis po'o le enzymatic digestion o otaota sela, ae o lenei metotia e masani ona maua ai le maualalo o le PCR ona o le le lava o le faʻamalolo o le nucleic acid.

Taofi le gaioiga o le polymerase i le taimi o le faʻalauteleina

I se tulaga lautele, o le faʻasaina o loʻo faʻaaogaina e avea o se atigipusa manatu e faʻamatala ai mea uma e taʻitaʻia ai iʻuga ole PCR. I se uiga fa'aolaola, fa'agata fa'atapula'a i le gaioiga o le enzyme, o lona uiga, e fa'aitiitia pe taofia ai le liua o mea e fai e ala i le fegalegaleai ma le nofoaga galue o le DNA polymerase po'o lona cofactor (eg, Mg2+ mo Taq DNA polymerase).
O vaega i totonu o le fa'ata'ita'iga po'o fa'aputuga eseese ma fa'aputuga o lo'o iai reagents e mafai ona fa'alavelave sa'o le enzyme pe maileia ana mea fa'atasi (fa'ata'ita'iga EDTA), ma fa'agataina ai le polymerase ma i'u ai i le fa'aitiitia po'o le fa'aletonu ole PCR i'uga.
Ae ui i lea, o le tele o feso'ota'iga i le va o vaega fa'afoliga ma su'esu'ega nucleic o lo'o iai fa'atatau o lo'o ta'ua fo'i o 'PCR inhibitors'. O le taimi lava e faʻalavelaveina ai le faʻamaoni o le sela e ala i le tuʻuesea ma faʻasaʻoloto le nucleic acid, o fegalegaleaiga i le va o le faʻataʻitaʻiga ma lona vaifofo lata ane ma le vaega malosi e mafai ona tupu. Mo se fa'ata'ita'iga, e mafai e 'scavengers' ona fusifusia le DNA e tasi pe fa'alua e ala i feso'ota'iga e le fa'atasi ma fa'alavelave i le fa'aesea ma le fa'amamāina e ala i le fa'aitiitia o le aofa'i o sini e iu lava ina o'o atu i le va'a tali PCR.
I se tulaga lautele, o loʻo i ai le iniseti PCR i le tele o sua o le tino ma mea e faʻaaogaina mo suʻesuʻega faʻataʻitaʻi (urea i le urine, hemoglobin ma le heparin i totonu o le toto), meaʻai faaopoopo (mea faʻapitoa, glycogen, gaʻo, Ca2 + ions) ma vaega i le siosiomaga (phenols). , u'amea mamafa)

E mafai ona maua i totonu ole siama ma sela eukaryotic, ole DNA e le taula'i, DNA-binding macromolecules o matrices tissue ma meafaigaluega falesuesue e pei o totigilima ma palasitika. O le fa'amamāina o nucleic acids i le taimi po'o le mae'a fo'i o le fa'aputuina o le auala sili lea mo le aveeseina o le iniseti PCR.
I aso nei, e mafai ona suitulaga masini fa'atosina fa'atosina le tele o fa'atonuga tusi lesona, ae 100% toe fa'aleleia ma/po'o le fa'amamāina o sini e le'i ausia lava. O lo'o iai pea ni fa'ainisinia fa'apitoa i nucleic acids ua fa'amama po'o ua uma fo'i ona aoga. E iai ta'iala 'ese'ese e fa'aitiitia ai le a'afiaga o inhibitors. O le filifiliga o le polymerase talafeagai e mafai ona i ai se aafiaga taua i le gaioiga o le inhibitor. O isi auala fa'amaonia e fa'aitiitia ai le fa'asaina o le PCR o lo'o fa'atuputeleina le fa'aogaina o le polymerase po'o le fa'aogaina o mea fa'aopoopo e pei ole BSA.
E mafai ona fa'aalia le fa'aogaina o le fa'aogaina o le fa'atonuga lelei ole faiga fa'alotoifale (IPC).
E tatau ona faʻaeteete e aveese uma mea faʻafoʻi ma isi vaifofo i totonu o le pusa faʻapipiʻi, e pei o le ethanol, EDTA, CETAB, LiCl, GuSCN, SDS, isopropanol ma le phenol, mai le nucleic acid isolate e ala i se laasaga fufulu maeʻaeʻa. Fa'alagolago i le latou fa'atonuga, e mafai ona latou fa'agaoioia pe fa'alavelaveina le PCR.